
11种四环素类抗生素的高效液相色谱HPLC检测方案
【四环素】
九九四环素类抗生素(Tetracyclines)是由放线菌产生的一类广谱抗生素,包括金霉素(Chlotetracycline)、土霉素(Oxytetracycline)、四环素(Tetracycline)、及半合成衍生物甲烯土霉素、强力霉素、二甲胺四环素等,其结构均含并四苯基本骨架;广泛用于多种细菌及立克次氏体、衣原体、支原体等所致之感染。四环素类抗生素在酸性和碱性条件下均不稳定,四环素类药物中含有许多羟基、烯醇羟基及羰基,在中性条件下能与多种金属离子形成不溶性螯合物。与钙或镁离子形成不溶性的钙盐或镁盐,与铁离子形成红色络合物,与铝离子形成黄色络合物。在体内Tetracyclines药物与钙离子形成的络合物呈黄色沉积在骨骼和牙齿上,小儿服用会发生牙齿变黄,孕妇服用后其产儿可能发生牙齿变色,骨骼生长抑制。因此小儿和孕妇对此药因慎用或禁服。
关于国家标准中四环素的检出限:
——动物源性食品中四环素(二甲胺四环素、土霉素、四环素、去甲基金霉素、金霉素、美他环素及多西环素)的检出限——50µg/kg;
——化妆品中四环素的检出限:
二甲胺四环素—25mg/kg 定量限:50mg/kg
土霉素、四环素、去甲基金霉素——10mg/kg 定量限:25mg/kg
金霉素、美他环素、多西环素——5mg/kg 定量限:10mg/kg
脱水四环素、差向脱水四环素——2.5mg/kg 定量限:5mg/kg
——牛奶及奶粉中土霉素、四环素、金霉素、多西环素的检出限:
牛奶中:土霉素、四环素——5µg/kg
金霉素、多西环素——10µg/kg
奶粉中:土霉素、四环素——25µg/kg
金霉素、多西环素——50µg/kg
本方案分离检测的11种四环素类抗生素:二甲胺四环素(MINO)、土霉素(OTC)、四环素(TC)、差向四环素(ETC)、金霉素(CTC)、差向金霉素(MCTC )、脱水四环素(ATC)、差向脱水四环素(ETAC)、甲烯土霉素(MTC)、去甲基金霉素(DMCTC)、多西环素(DC)。
【样品处理过程】
动物肝脏、肾脏、肌肉组织及水产品:称取均匀式样5g(精确到0.01g),置50mL聚丙烯离心管中,分别用20mL、20mL、10mL 0.1mol/L EDTA-Mcllvainc 缓冲溶液冰水浴超声提取三次,每次漩涡混匀1min,超声提取10min,3000r/min离心10min(温度低于15℃),合并上清液(控制总提取液的体积不超过50mL),定容至50mL,混匀,5000r/min离心10min(温度低于15℃),用快速滤纸过滤,待净化。
净化:准确吸取10mL提取液(相当于1g样品)以1滴/s的速度过HLB固相萃取柱,待样液完全流出后,依次用5mL水和5mL甲醇-水淋洗,弃去全部流出液。2.0Kpa以下减压抽干5min,最后用10mL甲醇+乙酸乙酯洗脱。将全部洗脱液氮吹干(温度低于40℃),用适量的甲醇溶解残渣,过0.45µm滤膜,待测定。
【色谱条件】
色谱柱:C18, 4.6 mm*250 mm,粒度5 µm
检测波长:350nm
检测温度:室温
九九流 速:1mL/min
流 动 相: A:乙腈 B:0.01moL/L草酸水溶液;梯度洗脱;
【谱图】
1-MINO, 2-ETC, 3-OTC, 4-TC, 5-DMCTC, 6-MCTC, 7-CTC, 8-MTC, 9-DC, 10-EATC, 11-ATC
【仪器配置】
技术与服务
TECHNICAL SERVICES